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中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)采用原理
簡(jiǎn)介:
堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡(jiǎn)稱(chēng)ALP或AKP)是一類(lèi)于哺乳動(dòng)物組織內(nèi)廣泛分布的磷酸酯酶,其活性在pH 9.2~9.8范圍內(nèi)最佳。它主要存在于附睪上皮之靜纖毛、腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、肝的毛細(xì)膽管膜、微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮等物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜),還可以出現(xiàn)在高爾基復(fù)合體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、腸上皮之溶酶體、吞飲小泡、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。
中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP) 采用偶氮偶聯(lián)法(又稱(chēng)同時(shí)偶聯(lián)法),而不是采用金屬沉淀法來(lái)顯示其堿性磷酸酶的活性,它作用原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下,細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可以通過(guò)水解AB-BI磷酸鹽,從而釋放出萘酚與磷酸,前者與偶聯(lián)重氮鹽可以生成有色產(chǎn)物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液專(zhuān)門(mén)用于骨髓細(xì)胞或血液涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位位于胞槳,呈藍(lán)色,結(jié)果比金屬鹽沉淀法更可靠。
儲(chǔ)存條件:
6個(gè)月有效。
自備材料:
1、 載玻片
2、 多聚甲醛(4%)
3、 顯微鏡
操作步驟(僅供參考):
(一)、涂片
1、通過(guò)NAP固定液固定,制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片,充分水洗。
2、滴加準(zhǔn)備好的NAP孵育液,孵育及水洗。
3、滴加甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。水洗、晾干后鏡檢。
(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1、準(zhǔn)備其他容器或6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞,棄液,使用PBS清洗干凈。
2、使用NAP固定液或多聚甲醛進(jìn)行固定,PBS清洗。
3、滴加配制好的NAP孵育液,置于濕盒內(nèi),避光孵育,PBS清洗。
4、加入甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。使用PBS清洗后鏡檢。
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