MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒使用指南

MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan，在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解，然后通過酶標(biāo)儀可以測定490nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

產(chǎn)品名稱：MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒

英文名稱：MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

規(guī)格：500T

儲存條件：-20℃，避光

使用說明：
1.收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，分于96孔板，每孔180μL，3000-10000個細(xì)胞/孔。
2.置37℃、5%CO2溫箱培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁，培養(yǎng)6-24小時。
3.加入適當(dāng)濃度的受試化合物，繼續(xù)培養(yǎng)適當(dāng)時間。
4.小心吸去上清，加入90μL新鮮培養(yǎng)液，再加入10μL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。
5.然后吸掉上清，每孔加入110μL Formazan溶解液，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490 nm處測量各孔的吸光值。
6.同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、 Formazan溶解液），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、 Formazan溶解液），每組設(shè)定3復(fù)孔。

注意事項：
1.由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
2.MTT溶液為黃色需避光保存，長時間光照會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。Formazan溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時可以37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。
3.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。