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HE染色實驗操作大綱

更新時間:2023-09-08      瀏覽次數(shù):183

HE染色實驗操作大綱

前言

HE染色法,即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)分別稱為嗜堿性和嗜酸性;若于兩種染料的親和力都不強,則呈中性。一般的組織變化和組織產(chǎn)物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態(tài)學最常用的染色方法。

染色結(jié)果:細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。

材料與方法

材料

1.1 主要試劑

石蠟、無水乙醇、氨水、硫酸鋁鉀、碘酸鈉、冰醋酸、甘油、蘇木素、伊紅

1.2 溶液配制

PBS溶液:600mlddH2O中溶解8g NaCl0.2g KCl、1.44g Na2HPO40.24g

KH2PO4,用HCl調(diào)節(jié)溶液pH7.4,定容至1L,濾器過濾后,高壓滅菌,室溫保存。

1.3 主要儀器及耗材

正置顯微鏡、恒溫烘箱、石蠟切片機 、攤片機、移液器、水浴鍋

數(shù)字切片掃描儀:濱松 NanoZoomer( S210)公司產(chǎn)品

方法

2.1樣本包埋與固定

1)固定:根據(jù)需要取材后置于福爾馬林中固定48小時后;

2)洗滌與脫水:將固定后的組織用流水沖洗,去除殘留的固定液和雜質(zhì)。不同濃度的乙醇逐級脫水,50%、70%、85%95%直至純酒精(無水乙醇),每級2小時。70%乙醇中可長期保存;

3)透明:50%酒精+50%二甲苯中2小時,純二甲苯兩小時,再一次純二甲苯兩小時;

4)浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬12小時,再先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬各3小時左右;

5)包埋:將浸好蠟的組織塊放入裝有蠟液的容器中,擺好組織塊位置。待石蠟凝固后將周圍多余的石蠟去除,準備切片;

6)切片:將切片刀裝在刀片機的刀架上并固定緊,固定蠟塊底座或蠟塊,調(diào)整蠟塊與刀至合適位置,刀刃與蠟塊表面呈5度角。調(diào)整切片機上的切片厚度為4-7μm,然后切片。

2.2  HE染色

1 脫蠟:60℃、30min;二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ;

2)水化:將脫蠟后的切片經(jīng)100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min 

3)將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘,流水沖洗;

41%鹽酸酒精分化0.5-1min;

5)流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻;

6碳酸鋰飽和水溶液反藍1min后流水沖洗;

7)入70%和90%酒精中脫水各10min;

8)入酒精伊紅染色液染色2-3min;。

9)脫水透明:染色后的切片經(jīng)純酒精脫水,再經(jīng)二甲苯使切片透明;

10)封片:將已透明的切片滴上中性樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后,貼上標箋,切片標本就可使用;

2.3 圖像采集

通過掃描,采集圖片。

送樣運輸要求:

樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運輸送樣。

切勿固定時間過長,切勿冷凍結(jié)冰。 

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