ELISA實(shí)驗(yàn)操作前的注意事項(xiàng)

　　1、樣本要求：樣本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除;避免使用溶血、高血脂樣本。樣本收集后若不立即檢測，凍存于-80°冰箱，避免反復(fù)凍融。樣本每次檢測使用前要混勻，用完后將相應(yīng)版布局及樣本編號記錄在實(shí)驗(yàn)本上，樣本及時(shí)放入冰箱。

　　2、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　1.對應(yīng)訂單找到相應(yīng)的樣本和試劑盒。

　　2.核對樣本個(gè)數(shù)、種類、編號、樣本量是否足夠，核對試劑盒種屬、個(gè)數(shù)、日期，確定試劑盒是否夠用、有沒有過期。

　　3.注意訂單上備注欄客戶的要求，是否做復(fù)孔等。(以上三點(diǎn)有問題在實(shí)驗(yàn)前及時(shí)與銷售溝通)

　　注：安排好時(shí)間，注意實(shí)驗(yàn)節(jié)奏，做好相應(yīng)的記錄幫助記憶，安排要有條理。

　　3、操作要求

　　1.試劑盒在使用前要平衡到室溫，底物在使用前應(yīng)保存在暗處，避光;

　　2.正式實(shí)驗(yàn)前需做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的稀釋倍數(shù)，做預(yù)實(shí)驗(yàn)前注意說明書上建議稀釋倍數(shù)。預(yù)實(shí)驗(yàn)雙抗夾心法選取標(biāo)曲最高兩個(gè)點(diǎn)，競爭法選取標(biāo)曲最高點(diǎn)與最低點(diǎn)，選取兩個(gè)樣本根據(jù)建議稀釋倍數(shù)稀釋三個(gè)梯度;

　　3.孵育溫度與時(shí)間準(zhǔn)確;洗板非常重要，每步洗板都一定要洗干凈;

　　4.標(biāo)準(zhǔn)品在用前稀釋，且稀釋的每一步都要混勻，注意標(biāo)曲的起始濃度是否與重溶濃度一致;

　　5.點(diǎn)樣量一定要精確，完全打盡移液槍內(nèi)樣本與試劑，快速、等量的將試劑分配到各個(gè)微孔中;

　　6.抗體和HRP稀釋倍數(shù)要嚴(yán)格按照說明書規(guī)定稀釋;

　　7.各步驟之間，需用封板貼密封反應(yīng)板避免蒸發(fā);實(shí)驗(yàn)一旦開始，應(yīng)連續(xù)完成所有的實(shí)驗(yàn)步驟，切勿中斷。

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