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TTC染色液2%使用步驟介紹

更新時(shí)間:2024-01-30      瀏覽次數(shù):316

 TTC染色液2%使用步驟介紹

產(chǎn)品名稱 TTC染色液2%

產(chǎn)品規(guī)格】 100ml               

儲(chǔ)存條件 -20℃冰凍  

有效期  6個(gè)月                   

產(chǎn)品介紹 

2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC),分子量為334.80,分子式為C19H15ClN4CAS號(hào)為298-96-4。TTC是脂溶性光敏感復(fù)合物,最初用于檢測種子生存能力,后來用于染色檢測哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞,TTC是呼吸鏈中吡啶核苷結(jié)合酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,TTC與正常組織中的呼吸酶反應(yīng)而呈紅色,而缺血組織內(nèi)呼吸酶活性下降,不能反應(yīng),故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白色,該染色是一種用于評價(jià)組織內(nèi)脫氫酶活性的大體染色方法。
  TTC染色液(2%)對心肌梗死及腦組織壞死區(qū)的觀測較電鏡早36h,較光鏡早24h,多用于尸檢中的新鮮心臟組織和腦組織以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型早期梗死組織的染色。其特點(diǎn):①TTC染色直接取材于新鮮組織即可染色,無需固定、包埋等步驟;②TTC染色時(shí)間短,一般20~30min;③TTC染色液可重復(fù)使用,10ml可染20張片子。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:

1、生理鹽水

2、低溫冰箱

3、4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林

 

操作步驟(僅供參考)

(一)腦組織染色

1、取待檢新鮮腦組織樣本(一 般可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦)取出后-20℃速凍20~ 30min,便于切片。

2、將待檢腦組織切片,一般動(dòng)物樣本層厚2~ 3mm ,人的樣本層厚3 ~ 5mm ,可連續(xù)切4~5張。第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間(參考:張均田主編,現(xiàn)代藥理試驗(yàn)方法)。

3、切片入TTC Stain(2%)避光浸染30 ~ 35min

4、切片入4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林中固定4~ 24h。

5、吸干組織表面清水,應(yīng)用IPP等圖像分析系統(tǒng)測量腦梗死面積并計(jì)算大腦梗死體積。

(二)種子染色

1、取不同活力的種子用刀片做橫切和沿種胚中央準(zhǔn)確縱切,取每粒種子的一半備用。

2、將上述種子置于TTC染色液(2%), 37°C避光孵育20min。

3、倒出染色液,自來水沖洗2~3次,立即觀察種胚著色情況。

 

染色結(jié)果:

正常心肌或腦組織

紅色

心肌或腦梗壞死區(qū)

蒼白色

缺血腦組織

介于紅色與蒼白色之間

 

 

注意事項(xiàng):

1、 TTC Stain(2%)對人體有輕微刺激性,請注意小心防護(hù)。

2、取腦時(shí)應(yīng)仔細(xì)保持大腦的完整性。

3、如果染色效果不佳,應(yīng)適當(dāng)延長染色時(shí)間。

4、樣本越新鮮越好,為了防止正常心肌及腦組織的酶活性減弱或消失,應(yīng)盡快染色。

 

5、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴-次性手套操作。



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