產(chǎn)品名稱：ATP含量檢測試劑盒

貨號：YX09117

規(guī)格：50T/48S

儲存條件：具體以標(biāo)簽為準(zhǔn)

有效期：6個月

檢測意義：

三磷酸腺苷(adenosine 5-triphosphate,ATP)是生物體內(nèi)能量轉(zhuǎn)換最基本的載體,其含量的變化直接關(guān)系到各器官的能量代謝。ATP 作為最重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP 水平的改變,會影響許多細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP 水平會下降,而高葡萄糖刺激等對于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi) ATP 水平。通常 ATP 水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細(xì)胞凋亡時 ATP 水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時發(fā)生狀態(tài)。 ATP 含量測定試劑盒可以用于檢測紅細(xì)胞或組織內(nèi)的 ATP 水平。

測定原理: 肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸,生成磷酸肌酸,用磷鉬酸比色法進(jìn)行檢測

樣本前處理:

1、紅細(xì)胞:抗凝全血取下層壓積紅細(xì)胞,一般按 1:4 的體積比加雙蒸水進(jìn)行稀釋,再 混勻使溶血完全,制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮 10 分 鐘,取出混勻抽提 1 分鐘,4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 10 分鐘,取上清液待測。

2、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織稱重,按重量(g):體積(mL)=1：9 的比例,加入 9 倍體積的沸雙蒸水,制成 10%的勻漿液,再置于沸水浴中煮 10 分鐘,取出混勻抽提 1 分鐘,3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘,取上清液待測。

3、培養(yǎng)細(xì)胞:先離心處理將細(xì)胞與培養(yǎng)上清分離,除去培養(yǎng)上清,得到下層沉淀細(xì)胞 (一般細(xì)胞數(shù)量達(dá)到 106),將收集好的細(xì)胞加入 300～500uL 熱雙蒸水,置于熱水浴 (90-100℃)中勻漿破碎,后將細(xì)胞懸液于沸水浴中加熱 10 分鐘,取出混勻抽提 1 分鐘,即可用于測定(如果存在大塊細(xì)胞碎片,需離心后取上清測定)。

注:混勻抽提 1 分鐘即為漩渦混勻 1 分鐘。

注意事項(xiàng):

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。對測定所用試管要求嚴(yán)格,要求不能有任何磷污染,建議使用全新一次性塑料試管,避免磷污染是檢測成敗的關(guān)鍵;

2、顯色應(yīng)用液配好后,不可放置太久,一般可保存五天,最好現(xiàn)用現(xiàn)配。隨時放冰箱 。

3、組織勻漿宜用 2%~5%濃度的勻漿上清,若樣本濃度過高,則底色過深(對照管 OD 過 高)需稀釋后再進(jìn)行測定;一般通過做預(yù)試驗(yàn)將對照 OD 值控制在 1.0 以下

4、為了您的安全與健康，實(shí)驗(yàn)時請穿戴防護(hù)服并佩戴一次性手套。

5、本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其他用途。