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匯總微生物檢測基礎(chǔ)知識

更新時間:2020-11-17      瀏覽次數(shù):697

匯總微生物檢測基礎(chǔ)知識

接種、分離純化和培養(yǎng)技術(shù)


一、培養(yǎng)
1、根據(jù)培養(yǎng)時是否需要氧氣,可分為好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)兩大類。
好氧培養(yǎng):也稱“好氣培養(yǎng)”。就是說這種微生物在培養(yǎng)時,需要有氧氣加入,否則就不能生長良好。在實驗室中,斜面培養(yǎng)是通過棉花塞從外界獲得無菌的空氣。三角燒瓶液體培養(yǎng)多數(shù)是通過搖床振蕩,使外界的空氣*地進入瓶中。


厭氧培養(yǎng):也稱“厭氣培養(yǎng)”。這類微生物在培養(yǎng)時,不需要氧氣參加。在厭氧微生物的培養(yǎng)過程中,zui重要的一點就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣。一般可采用下列幾種方法:
a.降低培養(yǎng)基中的氧化還原電位:常將還原劑如谷胱甘肽、硫基醋酸鹽等,加入到培養(yǎng)基中,便可達(dá)到目的。有的將一些動物的死的或活的組織如牛心、羊腦加入到培養(yǎng)基中,也可適合厭氧菌的生長。
b.化合去氧:這也有很多方法,主要有:用焦性沒食子酸吸收氧氣;用磷吸收氧氣;用好氧菌與厭氧混合培養(yǎng)吸收氧氣;用植物組織如發(fā)芽的種子吸收氧氣;用產(chǎn)生氫氣與氧化合的方法除氧。
c.隔絕阻氧:深層液體培養(yǎng);用石蠟油封存;半固體穿刺培養(yǎng)。
d.替代驅(qū)氧 用二氧氣碳驅(qū)代氧氣;用氮氣驅(qū)代氧氣;用真空驅(qū)代氧氣;用氫氣驅(qū)代氧氣;用混和氣體驅(qū)代氧氣。
2、根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài),可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩大類。


二、分離純化
含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物(mixed culture)。如果在一個菌落中所有細(xì)胞均來自于一個親代細(xì)胞,那么這個菌落稱為純培養(yǎng)(pure
culture)。在進行菌種鑒定時,所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化,方法有許多種。


1、傾注平板法
首先把微生物懸液通過一系列稀釋,取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50°左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合,然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中,待凝固之后,把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落,取單個菌落制成懸液,重復(fù)上述步驟數(shù)次,便可得到純培養(yǎng)物。


2、涂布平板法
首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?,取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上,然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上,經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落。


3、平板劃線法
zui簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多,常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時,接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋,zui后在所劃的線上分散著單個細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng),每一個細(xì)胞長成一個菌落。


4、富集培養(yǎng)法
富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長,在這些條件下,所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭,在生長能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。如果要分離一些專性寄生菌,就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中,使其大量生長。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。

5、厭氧法
在實驗室中,為了分離某些厭氧菌,可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器,把這支試管放在沸水0浴中加熱數(shù)分鐘,以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧。然后快速冷卻,并進行接種。接種后,加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面,使培養(yǎng)基與空氣隔絕。另一種方法是,在接種后,利用n2或co2取代培養(yǎng)基中的氣體,然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地分離某些厭氧菌,可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上,然后再把培養(yǎng)皿放在*密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。

三、接種
將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種。


接種和分離工具
1.接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀


常用的接種方法有以下幾種:
1)劃線接種 這是zui常用的接種方法。即在固體培養(yǎng)基表面作來回直線形的移動,就可達(dá)到接種的作用。常用的接種工具有接種環(huán),接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。


2)三點接種 在研究霉菌形態(tài)時常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上,成等邊三角形的三點,讓它各自獨立形成菌落后,來觀察、研究它們的形態(tài)。除三點外,也有一點或多點進行接種的。


3)穿刺接種 在保藏厭氧菌種或研究微生物的動力時常采用此法。做穿刺接種時,用的接種工具是接種針。用的培養(yǎng)基一般是半固體培養(yǎng)基。它的做法是:用接種針蘸取少量的菌種,沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺,如某細(xì)菌具有鞭毛而能運動,則在穿刺線周圍能夠生長。


4)澆混接種 該法是將待接的微生物先放入培養(yǎng)皿中,然后再倒入冷卻至45°c左右的固體培養(yǎng)基,迅速輕輕搖勻,這樣菌液就達(dá)到稀釋的目的。待平板凝固之后,置合適溫度下培養(yǎng),就可長出單個的微生物菌落。


5)涂布接種 與澆混接種略有不同,就是先倒好平板,讓其凝固,然后再將菌液倒入平板上面,迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布,讓菌液均勻分布,就可長出單個的微生物的菌落。


6)液體接種 從固體培養(yǎng)基中將菌洗下,倒入液體培養(yǎng)基中,或者從液體培養(yǎng)物中,用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中,或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中,都可稱為液體接種。


7)注射接種 該法是用注射的方法將待接的微生物轉(zhuǎn)接至活的生物體內(nèi),如人或其它動物中,常見的疫苗預(yù)防接種,就是用注射接種,接入人體,來預(yù)防某些疾病。


8)活體接種 活體接種是專門用于培養(yǎng)病毒或其它病原微生物的一種方法,因為病毒必須接種于活的生物體內(nèi)才能生長繁殖。所用的活體可以是整個動物;也可以是某個離體活組織,例如猴腎等;也可以是發(fā)育的雞胚。接種的方式是注射,也可以是拌料喂養(yǎng)。


無菌操作
培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后,用經(jīng)過滅菌的工具(如接種針和吸管等)在無菌條件下接種含菌材料(如樣品、菌苔或菌懸液等)于培養(yǎng)基上,這個過程叫做無菌接種操作。在實驗室檢驗中的各種接種必須是無菌操作。
(1)接種滅菌 (2)開啟棉塞 (3)管口滅菌 (4)挑起菌苔 (5)接種 (6)塞好棉塞。
 

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