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了解霉菌形態(tài)

更新時(shí)間:2021-03-22      瀏覽次數(shù):866

了解霉菌形態(tài)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
了解霉菌形態(tài),掌握微生物載玻片濕室培養(yǎng)方法。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.根霉假根的觀察。

2.霉菌載玻片濕室培養(yǎng)。

3.曲霉、青霉、根霉、毛霉形態(tài)觀察。

一、實(shí)驗(yàn)材料和用具

產(chǎn)黃青霉(Penicfillium chrysogenum)、黑曲霉(Aspergillus niger)、黑根霉(Rhizopus nigrians)、總狀毛霉(Mucor racemosus)等斜面菌種。

半固體PDA培養(yǎng)基、乳酸苯酚固定液、棉藍(lán)染色液、20%甘油;



透明膠帶、剪刀、培養(yǎng)皿、載玻片、口形玻棒擱架、蓋玻片、圓形濾紙片、細(xì)口滴管、鑷子、顯微鏡、接種環(huán)。

二、操作步驟

(一)霉菌的載玻片濕室培養(yǎng)

可4人合作,每人制作一霉菌的載玻片。

1.準(zhǔn)備濕室 在培養(yǎng)皿底鋪一張圓形濾紙片,其上放一“冂”形載玻片擱架,在擱梁上放一塊載玻片和兩塊蓋玻片,蓋上皿蓋,外用紙包扎,經(jīng)12lC濕熱滅菌30min后,置60℃烘箱中烘干,備用。

2.接種 用接種環(huán)挑取少量待觀察的霉菌孢子至濕室內(nèi)的載玻片上,每張載玻片可接同一菌種的孢子兩處。接種時(shí)只要將帶菌的接種環(huán)在載玻片上輕輕碰幾下即可(務(wù)必記住接種的位置)。

3.加培養(yǎng)基 用無(wú)菌細(xì)口滴管吸取少量融化約60℃的培養(yǎng)基,滴加到載玻片的接種處,培養(yǎng)基應(yīng)滴得圓而薄,其直徑約為0.5cm(滴加量一般以l/2小滴為宜)。

4.加蓋玻片 在培養(yǎng)基未*凝固前.用無(wú)菌鑷子將皿內(nèi)蓋玻片蓋在瓊脂塊薄層上,用鑷子輕壓,使蓋玻片和載玻片間的距離相當(dāng)接近,但不能壓扁,否則不透氣。

5.倒保濕劑 每皿倒大約3mL 20%的無(wú)菌甘油,使皿內(nèi)的濾紙*潤(rùn)濕,以保持皿內(nèi)濕度,皿蓋上注明菌名、組別和接種日期。此為制成的載玻片濕室,置28℃恒溫培養(yǎng)3~5d。

(二)黑根霉假根的培養(yǎng)

將融化的PDA培養(yǎng)基,冷卻至50℃倒入無(wú)菌平皿,其量約為平皿高度的l/2。冷凝后,用接種環(huán)沾取根霉孢子,在平板表面劃線接種。然后將平皿倒置,在皿蓋內(nèi)放一無(wú)菌載玻片,于28℃培養(yǎng)2~3d后,可見(jiàn)根霉的氣生菌絲倒掛成胡須狀,有許多菌絲與載玻片接觸,并在載玻片上分化出假根和匍匐菌絲等結(jié)構(gòu)(圖13—1)。

(三)鏡檢觀察

1.濕室培養(yǎng)霉菌鏡檢載玻片 從培養(yǎng)16~20h開(kāi)始,通過(guò)連續(xù)觀察,可了解孢子的萌發(fā)、菌絲體的生長(zhǎng)分化和子實(shí)體的形成過(guò)程。將濕室內(nèi)的載玻片取出,直接置于低倍鏡和高倍鏡下觀察曲霉、青霉、毛霉、根霉等霉菌的形態(tài),重點(diǎn)觀察菌絲是否分隔,曲霉和青霉的分生孢子形成特點(diǎn),曲霉的足細(xì)胞,根霉和毛霉的孢子囊和孢囊孢子。繪圖。

2.粘片觀察 取一滴棉藍(lán)染色液置于載玻片中央,取一段透明膠帶,打開(kāi)霉菌平板培養(yǎng)物,粘取菌體,粘面朝下,放在染液上。鏡檢。

3.假根觀察 將培養(yǎng)-根霉假根的平皿打開(kāi),取出皿蓋內(nèi)的載玻片標(biāo)本,在附著菌絲體的一面蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察。只要用低倍鏡就能觀察到假根及從根節(jié)上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和兩個(gè)假根間的匍匐菌絲,觀察時(shí)注意調(diào)節(jié)焦距以看清各種構(gòu)造。

4.制成永-久裝片 把觀察到霉菌形態(tài)較清晰,完整的片子,制成標(biāo)本作較保存。制備方法是,輕輕揭去蓋玻片,如果載玻片上有瓊脂,仔細(xì)挑去,然后滴加少量乳酸苯酚固定液,蓋上清潔蓋玻片,在蓋玻片四周滴加樹(shù)膠封固。

三、注意事項(xiàng)

載玻片濕室培養(yǎng)時(shí),蓋玻片不能緊貼載玻片,要彼此有極小縫隙,一是為了通氣;二是使各部分結(jié)構(gòu)平行排列,易于觀察。

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