RNase A/核糖核酸酶A品種齊全,現(xiàn)貨大促
核糖核酸酶A是內(nèi)切核糖核酸酶,可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端,切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應(yīng)終產(chǎn)物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無輔因子及二價陽離子存在時,核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al.1977)或氧釩—核糖核苷復(fù)合物(Puskas et al.1982)所抑制。
核糖核酸酶A(Ribonuclease A,RNase A),一種含4個二硫鍵的單鏈多肽,分子量約為13.7 kDa。作為一種核糖核酸內(nèi)切酶(endoribonuclease),特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)殘基。具體來說,切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類核苷酸3’-核糖上磷酸基團形成的磷酸二酯鍵,從而使得2’,3’-環(huán)磷酸水解為對應(yīng)的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)RNase A切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和A-PG)。
RNase A切割單鏈RNA活性高,且在多種反應(yīng)條件下均有活性:在低鹽濃度(0-100 mM NaCl)下,可用來切割單鏈RNA、雙鏈RNA以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈,而高鹽濃度(≥0.3 M)下,RNase A僅特異性切割單鏈RNA。
核糖核酸酶A(RNase A)常見的應(yīng)用在于質(zhì)粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA,因此制備過程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一,可采用水浴煮沸這種傳統(tǒng)方法來滅活DNase活性。另外,本品還可用于RNA酶保護分析、RNA序列分析等分子生物學(xué)實驗。
本品以溶液形式提供,濃度為10 mg/mL。推薦工作濃度為1-100 μg/mL,因應(yīng)用類型的不同而異。
此外,它具有顯著的細胞毒性,可以殺滅許多腫瘤細胞系,可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細胞中的復(fù)制,可以治療乙肝。
(1)從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區(qū)。
(2)確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al.1985,Winter et al.1985)。 在此方法中,RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯配可被RNA酶A識別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動子的質(zhì)粒,在體外合成與野生型DNA或RNA互補的32p標記RNA探針,然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火, 所產(chǎn)生的單堿基錯配可用RNA酶A切割,通過凝膠電泳分析切割產(chǎn)物的大小即可確定錯配的位置。在所有各種可能的單堿基錯配中,大約50%可用此法確定。