P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
相關(guān)文章 / ARTICLE
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)檢測試劑盒使用說明!
產(chǎn)品名稱:谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)檢測試劑盒 微板法
檢測原理:谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)在37℃及PH7.4條件下,作用于丙氨酸及a-酮戊二酸組成的底物,生成丙酮酸及谷氨酸。反應(yīng)30分鐘后(固定時(shí)間)加入2,4-二硝基苯肼(DNPH)鹽酸溶液,既中止反應(yīng),同時(shí)DNPH與酮酸中羰基加成,生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色,于505nm比讀吸光度并計(jì)算酶活力。
測定范圍:本試劑盒可以測定各類動(dòng)物血清(漿)、組織及培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)液等樣本中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力(ALT)。
自備儀器和用品:
酶標(biāo)儀(510nm或505nm)、微量移液器、漩渦混勻器
試劑組成:
96T | 規(guī)格 | 組分 | 保存 |
試劑一 | 5mlX1瓶 | 谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液 | 4℃冰箱保存6個(gè)月 |
試劑二 | 5mlX1瓶 | 2,4-二肖基苯肼液 | 4℃冰箱保存6個(gè)月 |
試劑三 | 5mlX1瓶 | 4mol/L氫氧化鈉液 | 室溫密封保存6個(gè)月 |
試劑四 | 1支 | 2umol/ml丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液 | 4℃冰箱保存6個(gè)月 |
試劑五 | 1支 | 0.1mol/L磷酸鹽緩沖液 | 4℃冰箱保存6個(gè)月 |
0.4mol/L氫氧化鈉液的配制:臨用時(shí)按4mol/L氫氧化鈉液:雙蒸水=1:9的比例稀釋,需多少配多少,室溫密封保存。 |
操作過程(僅供參考)
1.樣本前處理:
A.血清(漿)及其他液體待測樣本:直接取樣測定。
B.動(dòng)物組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9的比例,加入9倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,取上清液待測。
C.培養(yǎng)細(xì)胞樣本前處理:將收集好的細(xì)胞用等滲緩沖液(推薦0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)清洗1—2次;1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清,留細(xì)胞沉淀,加入勻漿介質(zhì)(推薦加入0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水),冰浴條件下超聲破碎或手動(dòng)勻漿,制備好的勻漿液不離心,待測。
2.操作表:
測定孔 | 對照孔 | |
基質(zhì)液(ul)37℃已預(yù)溫 | 2O | 20 |
待測樣本(ul) | 5 |
測定孔每吸取一個(gè)樣本,將吸嘴伸入孔板底部基質(zhì)液中,反復(fù)吸打混勻后
37℃反應(yīng)30分鐘
2,4-二肖基苯肼液(ul) | 20 | 20 |
待測樣本(ul) | 5 |
對照孔每吸取一個(gè)樣本,將吸嘴伸入孔板底部液體中,反復(fù)吸打混勻后
37℃反應(yīng)20分鐘
0.4mol/L氫氧化鈉液(ul) | 200 | 200 |
輕輕水平搖動(dòng)96孔板混勻,室溫放置15分鐘,510nm波長,酶標(biāo)儀測各孔OD值,以(絕對OD值=測定孔0D值減去對照孔OD值),查標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得相應(yīng)的ALT/GPT活力單位。
注意事項(xiàng):
1.比色法中常用的有賴氏(Reitman-Frankel)法及金氏法(King)法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù),是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門氏反光光度法(速率法)作對比測定求得的。以卡門氏單位報(bào)告結(jié)果比較準(zhǔn)確。
卡門氏單位定義:1ml液體,反應(yīng)液總?cè)萘?ml,波長340nm,1cm光徑,25℃,1min內(nèi)所生成的丙酮酸,使NADH氧化成NAD+而引起吸光度每下降0.001為一個(gè)單位(1卡門氏單位=0.482U/L,25℃)
2.一般血清標(biāo)本內(nèi)源性酮酸很少,血清對照孔吸光度值接近試劑空白孔(以雙蒸水代替血清,其他和對照孔同樣操作)。所以成批標(biāo)本測定時(shí),一般不需要每一標(biāo)本都作本身血清對照孔,以試劑空白孔代替即可,但對嚴(yán)重脂血、黃疸或溶血血清,每份標(biāo)本應(yīng)做對照孔。
3.酶活力超過150單位時(shí),用生理鹽水稀釋血清后重測。
4.一般的血清對照孔(或稱標(biāo)本空白孔)的吸光度作為日常質(zhì)控的指標(biāo)之一;如相差大,可考慮a-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。
5.血清中ALT在室溫(25℃)可保存2天,在0--4℃可保存一周,在-25℃可保存1個(gè)月。
6.本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!
南京億迅生物科技有限公司
025-65010873
江蘇省南京市江寧高新園
196099363@qq.com
掃碼關(guān)注我們
Copyright © 2024南京億迅生物科技有限公司 All Rights Reserved 備案號(hào):蘇ICP備2020061857號(hào)-1
技術(shù)支持:環(huán)保在線 管理登錄 sitemap.xml
025-65010873
掃碼添加微信
點(diǎn)
擊
隱
藏