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大腸桿菌檢測(cè)的新方法,你知道嗎?

更新時(shí)間:2020-07-17      瀏覽次數(shù):423

大腸桿菌檢測(cè)的新方法,你知道嗎?

 

大腸桿菌 是人和許多動(dòng)物腸道中主要且數(shù)量較多的一種細(xì)菌,主要寄生在大腸內(nèi)。
那怎么檢測(cè)大腸桿菌呢?又該怎么消滅它呢?
 

億迅生物概述出6種大腸桿菌檢測(cè)的新方法。

1 、氣相色譜(GC)和高效液相色譜法(HPLC)
氣相色譜法主要是將大腸桿菌經(jīng)過(guò)一系列衍生化的前處理后,為接下來(lái)的分析研究提供盡可能多的化學(xué)組分。大腸桿菌的污染程度可以用頂空氣相色譜法來(lái)分析,其原理是利用食品密封系統(tǒng)頂部的微生物代謝產(chǎn)物CO2對(duì)微生物進(jìn)行分析。這種方法對(duì)食品質(zhì)量安全檢測(cè)有重大意義。與上述傳統(tǒng)技術(shù)相比,此種方法具有檢測(cè)速度快、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。

高效液相色譜法(HPLC)主要是根據(jù)離子配對(duì)反相層析的原理來(lái)分析核酸。HPLC主要是針對(duì)DNA -片段分離。長(zhǎng)鏈DNA所攜帶的磷酸基團(tuán)比較多,因此會(huì)有更多的TEAA與之相融合,其在柱內(nèi)停留的時(shí)間增加。因?yàn)橐译婢哂杏H水性,可以通過(guò)其而將DNA分離,在具備一定的變性溫度下,可以通過(guò)圖譜顯示明顯的吸收峰。該技術(shù)具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、成本低等優(yōu)點(diǎn),可大大提高工作效率。

2 、ATP生物發(fā)光技術(shù)
ATP生物發(fā)光技術(shù)是近些年來(lái)發(fā)展較快的微生物快速檢測(cè)方法。ATP是活細(xì)胞中普遍的能量代謝產(chǎn)物,為細(xì)胞提供各種生理活動(dòng)所需的能量,而且其在生物體內(nèi)含量維持在一定的范圍內(nèi)。ATP含量檢測(cè)的一種方法是熒光光度法,生物發(fā)光是活細(xì)胞在熒光素酶催化下發(fā)出的熒光。目前使用的熒光素酶主要來(lái)源于北美的螢火蟲(chóng),相對(duì)分子質(zhì)量為62000的蛋白質(zhì),它可以催化熒光素的氧化反應(yīng),這種反應(yīng)的終產(chǎn)物不穩(wěn)定,很快分解產(chǎn)生熒光。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,不同之處在于幾分鐘內(nèi)便可獲得檢測(cè)結(jié)果,而且熒光光度計(jì)是便攜式的,使用非常方便,適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),這種技術(shù)可以用于檢測(cè)微小的污染物水平以及食品加工設(shè)備及其表面的清潔程度的檢測(cè)。

3 、PCR檢測(cè)技術(shù)
聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)即PCR(polymerase chain reaction),該技術(shù)是在1971年首先被Kleppe等提出,1985年才作為一種檢測(cè)方法獲得認(rèn)可。PCR檢測(cè)技術(shù)是一種聚合酶鏈反應(yīng),其采用變性―退火―延伸三個(gè)步驟使DNA基因能夠在體外實(shí)現(xiàn)解旋解鏈,類似于一種體外增加、復(fù)制形式。理論上可在2h內(nèi)將一個(gè)DNA分子擴(kuò)增到106~109倍,采用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光條帶。
目前PCR技術(shù)廣泛用于生命科學(xué)的許多學(xué)科中。在食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域,PCR可用于快速檢測(cè)食品中的微生物含量。常用的主要有免疫PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、多重PCR、反轉(zhuǎn)錄PCR和實(shí)時(shí)定量PCR等。史云等建立了用于肉及肉制品中大腸桿菌的兩重PCR檢測(cè)方法,但該方法需要較長(zhǎng)的時(shí)間的樣品純化處理,且對(duì)操作人員的專業(yè)知識(shí)的要求也較高。

4 、生物傳感器檢測(cè)技術(shù)
生物傳感器主要是以生物化學(xué)傳感技術(shù)為基礎(chǔ),用抗體、酶、細(xì)胞等作為識(shí)別元件,并與信號(hào)轉(zhuǎn)換器和電子測(cè)量?jī)x聯(lián)合構(gòu)成的一種分析工具。目前已經(jīng)成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶?jìng)鞲衅鳌NA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優(yōu)點(diǎn),如高靈敏度、高選擇性、較好的穩(wěn)定性、低成本、且能在復(fù)雜的體系中快速在線監(jiān)測(cè)。
現(xiàn)在用于信號(hào)傳導(dǎo)的方法有表面聲波傳導(dǎo)、電氣化學(xué)方法和光學(xué)傳導(dǎo)法。用于食品微生物檢測(cè)的主要是免疫傳感器和基因傳感器,原理是利用DNA雜交和抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè),再將其轉(zhuǎn)換為光信號(hào)或電信號(hào)并通過(guò)儀器放大輸出。生物傳感器的分子識(shí)別元件的載體可采用多種材料,利用較多的是光纖、熒光光度計(jì)等。
殷涌光等人利用抗體免疫吸附反應(yīng),采用一次抗體――抗原一二次抗體的夾心法將膠體金復(fù)合抗體作為二次抗體大幅度增加質(zhì)量,并延長(zhǎng)膠體金復(fù)合抗體與微生物的結(jié)合過(guò)程,放大和穩(wěn)定信號(hào),從而顯著提高檢測(cè)精度。

5 免疫磁珠技術(shù)(IMS)
免疫磁珠技術(shù)是一種大腸桿菌的分離技術(shù)。其原理是以磁珠為抗體載體,磁珠和大腸桿菌結(jié)合,通過(guò)磁力來(lái)實(shí)現(xiàn)力學(xué)移動(dòng)進(jìn)而將大腸桿菌進(jìn)行分離。與其他的細(xì)菌分離方法相比,免疫磁珠技術(shù)在很大程度上提高了樣本中病原性副溶血性弧菌的檢測(cè)效率。
免疫磁珠技術(shù)可以快速地在不同菌種的樣本中處理不同的微生物,該方法可以大幅度地提升檢測(cè)效率。

6、 自動(dòng)化儀器
自動(dòng)免疫測(cè)定分析儀誕生于20世紀(jì)70年代。隨著科技的發(fā)展,自動(dòng)免疫測(cè)定分析儀在各領(lǐng)域的應(yīng)用也越來(lái)越多,該儀器使用簡(jiǎn)單,無(wú)太多操作干擾,既省時(shí)省力,又大大提高了檢測(cè)的精確度和靈敏度。
這種自動(dòng)酶標(biāo)免疫測(cè)試系統(tǒng)目前在國(guó)內(nèi)外是酶免疫自動(dòng)化系統(tǒng)中應(yīng)用廣泛的一種。但是由于與其配套的試劑昂貴,從而限制了其在基層實(shí)驗(yàn)室的使用。

 

大腸桿菌檢測(cè)的新方法,你知道嗎?

 

 

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