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新型快速酵母轉(zhuǎn)化試劑盒新品現(xiàn)貨供應(yīng)
產(chǎn)品介紹:
酵母菌落快速轉(zhuǎn)化試劑盒是以未經(jīng)凍存的釀酒酵母平板菌落(無需搖菌)或者菌液作為菌體來源(短期4 ℃保存的平板或者菌液亦可使用),無需制備感受態(tài)細(xì)胞,無需分步熱激,一步轉(zhuǎn)化,整個操作流程在90 min內(nèi)完成。省去了通過兩次培養(yǎng)獲得狀態(tài)良好的菌體的過程,以及制備感受態(tài)的過程,節(jié)省了1-2天的菌種培養(yǎng)轉(zhuǎn)化時間,或者購買感受態(tài)的經(jīng)費(fèi)。其轉(zhuǎn)化率可達(dá)經(jīng)典酵釀酒母轉(zhuǎn)化方法(SK2400)的50-80%(常規(guī)酵母雜交菌種檢測)。轉(zhuǎn)化效率可滿足除文庫傳化之外的其它轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。
菌落轉(zhuǎn)化步驟:
1.在無菌的1.5 mL的離心管中加入100 μL的P1溶液(轉(zhuǎn)化液)。
2.在上述轉(zhuǎn)化液中加入1 μg的質(zhì)粒DNA。共轉(zhuǎn)加入每種質(zhì)粒各1 μg。
3.挑取2-3個較大酵母菌落加入上述轉(zhuǎn)化液中,震蕩混勻。
4.置于42 ℃水浴60 min(每隔20 min 顛倒混勻一次,避免酵母菌沉底)。
5.可選步驟:3,000 rpm離心3 min,棄上清。用400 μL YPD Plus Liquid Medium(YT0004)重懸,30 ℃搖床震蕩培養(yǎng)30-60 min。YPD Plus用于轉(zhuǎn)化后復(fù)蘇酵母菌,轉(zhuǎn)化效率可以提高50-100。
6.3,000 rpm離心3 min。加入100 μL無菌水重懸菌體。
7.將重懸菌體全部涂布于相應(yīng)的缺陷型培養(yǎng)基平板上。
8.30 ℃恒溫培養(yǎng)3-5天,直至平板長出菌落。
菌液轉(zhuǎn)化步驟:
收集1.5-3 mL酵母菌液沉淀后,加入100 μL P1溶液(轉(zhuǎn)化液)和1 μg質(zhì)粒DNA后震蕩混勻。后續(xù)步驟和平板菌落轉(zhuǎn)化步驟4-8相同。
注意事項(xiàng):
1. 轉(zhuǎn)化全程要求無菌操作。
2. 為了保證轉(zhuǎn)化效率,感受態(tài)不宜直接用液氮凍存。
3. 增加酵母質(zhì)粒的純度和濃度可以提高轉(zhuǎn)化效率。
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