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顯色基質(zhì)鱟試劑盒新品推薦

更新時(shí)間:2020-11-25      瀏覽次數(shù):392

顯色基質(zhì)鱟試劑盒新品推薦

 

顯色基質(zhì)鱟試劑 ( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于體外細(xì)菌內(nèi)毒素的定量檢測(cè),禁止以任何途徑進(jìn)入機(jī)體。

 

【原理】鱟試劑為鱟科動(dòng)物東方鱟的血液變形細(xì)胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下(溫度,pH 值及無(wú)干擾物質(zhì)),細(xì)菌內(nèi)毒素激活 C 因子,引起一系列酶促反應(yīng),激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì),使其分解為多肽和黃色的對(duì)硝基苯胺(pNA,λmax = 405nm) 。在一定時(shí)間內(nèi),pNA 的 生成量與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度成正關(guān),據(jù)此,可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。同時(shí),對(duì)硝基苯胺(pNA)也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色(λmax = 545nm),避免了供試品本身的顏色對(duì) 405nm 處吸收峰的干擾。

 

鱟試劑:按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中,輕輕振搖使鱟試劑*溶解, 注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應(yīng)在 10 分鐘內(nèi)用完。 顯色基質(zhì):按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于顯色基質(zhì)中,輕輕振搖使顯色基質(zhì)*溶解。顯色基質(zhì)溶液可在無(wú)污染的條件下于 4 ºC 貯存 8 小時(shí)以?xún)?nèi)。

偶氮化試劑 1:按標(biāo)示量加反應(yīng)終止劑鹽酸于偶氮化試劑 1 中,
偶氮化試劑 2:按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑 2 中,
偶氮化試劑 3:按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑 3 中,
偶氮化試劑溶液可于 4ºC 貯存 1 周。 3.4 實(shí)驗(yàn)操作 取無(wú)熱原試管,加入 100μl 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液,或供試品。再加入 100μl 鱟試劑溶液,混勻,37ºC 溫育 T1分鐘。 溫育結(jié)束,加入 100μl 顯色基質(zhì)溶液,混勻,37ºC 溫育 T2分鐘。 溫育結(jié)束,加入 500μl 偶氮化試劑 1 溶液,混勻, 加入 500μl 偶氮化試劑 2 溶液,混勻 加入 500μl 偶氮化試劑 3 溶液,混勻,靜置 5 分鐘,于 545nm 波長(zhǎng)處讀取吸光度值。

 

【供試品的干擾試驗(yàn)】 供試品的干擾試驗(yàn)詳見(jiàn)《中華人民共和國(guó)藥典》2005 版中《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的 “光度測(cè)定法干擾試驗(yàn)”。

當(dāng)鱟試劑、供試品的來(lái)源、配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí),須進(jìn)行干擾試驗(yàn),步驟如下: 
1 選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度(設(shè)為 λm),作為供試品干擾試驗(yàn)中添加的內(nèi)毒素濃度,配制含 λm 內(nèi)毒素的供試品陽(yáng)性對(duì)照,測(cè)量出該溶液的內(nèi)毒素濃度,稱(chēng)為 Cs;
2 測(cè)量出未添加外源內(nèi)毒素的供試品溶液內(nèi)毒素濃度,稱(chēng)為 Ct;
3 計(jì)算該試驗(yàn)條件下的回收率 R=(Cs–Ct)/λm×100
4 當(dāng) R 在 50%~200%之間,則認(rèn)為在此試驗(yàn)條件下供試品溶液不存在干擾作用。
5 當(dāng) R 在 50%~200%之外,需對(duì)供試品進(jìn)行系列稀釋(稀釋倍數(shù)不得超過(guò)有效稀釋倍數(shù) MVD)或進(jìn)行其它處理消除干擾,每一稀釋溶液都重復(fù)步驟 1-3,直到內(nèi)毒素的回收率 R 在 50%~200%之間。選擇回收率 R 接近 100的稀釋倍數(shù)進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)。

 

 

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