P產(chǎn)品分類RODUCT CATEGORY
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ATP 含量檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
產(chǎn)品說明: ATP 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細(xì)胞能量 代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定 ATP 含量并且計(jì)算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。 HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫 生成 NADPH ,NADPH 在 340nm 有特征吸收峰,NADPH 和 ATP 含量成正比,以此反應(yīng) ATP 含 量。
自備儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水和氯仿。
操作步驟:
一、ATP 的提取:
1、血清(漿)中 ATP 的提?。喊凑昭澹{)體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比 例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 提取液),充分震蕩,10000g,4℃離心 10min;取 上清液至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心 3min,取上清,置 冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。
2、組織中 ATP 的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心 10min,取上清至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心 3min,取上清,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。
3、細(xì)胞或細(xì)菌中 ATP 的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液), 超聲波破碎 1min(冰浴,強(qiáng)度 20%或 200W,超聲 2s,停 1s),10000g 4 ℃離心 10min;取上 清液至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心 3min,取上清,置冰 上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)
注意事項(xiàng):
1、 加入提取液離心后的上清若為渾濁為正常現(xiàn)象。
2、 提取過程嚴(yán)格在冰浴條件下進(jìn)行。
3、 當(dāng)吸光值大于 1.2 或者ΔA 測(cè)定大于 1.2 時(shí),可以將樣品稀釋后進(jìn)行測(cè)定。若吸光值小于 0.01, 則可以增加反應(yīng)時(shí)間(5min 或 10min)來測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品需要增加同樣的反應(yīng)時(shí)間。
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