直接抗人球蛋白試劑盒操作步驟

簡(jiǎn)要描述：直接抗人球蛋白試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)。用于抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）是測(cè)定結(jié)合在紅細(xì)胞上的抗體和/或補(bǔ)體的主要方法。直接Coombs試驗(yàn)是檢測(cè)體內(nèi)已被抗體和/或補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞。間接Coombs試驗(yàn)通過(guò)血清與細(xì)胞的孵育，證實(shí)抗體和/或補(bǔ)體與紅細(xì)胞在體外的結(jié)合。根據(jù)醫(yī)療器械體外診斷試劑注冊(cè)分類(lèi)，本試劑暫時(shí)只用于直接抗球蛋白試驗(yàn)。

[檢驗(yàn)方法]

1.     標(biāo)本的收集：見(jiàn)[樣本要求]

2.     直接抗球蛋白試驗(yàn)：

2.1 將1滴受檢者3％紅細(xì)胞懸液加入干凈的小試管中（75×12mm），用鹽水洗滌3次[以3400轉(zhuǎn)/分(1000g)，離心1分鐘]。每次洗滌后，將上清液全部倒出。

2.2 加入2滴抗IgG, C3d (多特異性)或抗IgG或抗C3d，以3400轉(zhuǎn)/分(1000g)，離心15秒，用肉眼或借助光鏡觀(guān)察凝集，并按程度記錄結(jié)果。

2.3 判斷結(jié)果須持一定角度輕輕地?fù)u動(dòng)試管直到松動(dòng)所有的細(xì)胞，然后反復(fù)傾斜試管，直到均勻的細(xì)胞懸液（陰性）或者凝集物（陽(yáng)性）為止。

2.4 如陰性結(jié)果，在室溫中放置5-10分鐘，再離心一次，重讀結(jié)果。這樣做，陰性反應(yīng)有時(shí)會(huì)變成陽(yáng)性。

    注意：僅對(duì)C3d和IgA致敏紅細(xì)胞有增強(qiáng)作用，IgG致敏細(xì)胞反而會(huì)變?nèi)酰ㄒ?jiàn)注意事項(xiàng)）。

3.     陽(yáng)性對(duì)照（IgG抗D致敏細(xì)胞）：

3.1 每批新的試劑，或在4℃保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，需做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，至少每月一次。1滴陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞加2滴直接抗人球蛋白試劑，離心判定結(jié)果。

3.2 在試驗(yàn)中，于判為陰性的試管內(nèi)加入1滴陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞，再離心，然后重懸浮，判定結(jié)果。如果zui初洗滌能充分除去所有未結(jié)合的球蛋白，結(jié)果為陽(yáng)性。這是一個(gè)重要的對(duì)照，因?yàn)檫@是檢測(cè)細(xì)胞是否洗滌充分的*方法。

3.3 陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞（IgG抗D致敏細(xì)胞）制備： 1份市售抗D（IgG）試劑（效價(jià)≥1:8）＋1份Rh（D）陽(yáng)性O(shè)型紅細(xì)胞混勻，370C水浴30分鐘，用生理鹽水三洗，配成3％紅細(xì)胞懸液，當(dāng)天使用。

[檢驗(yàn)結(jié)果的解釋] 

陽(yáng)性反應(yīng)——出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。表示紅細(xì)胞上有相應(yīng)抗體存在。

陰性反應(yīng)——紅細(xì)胞不凝集。表示紅細(xì)胞沒(méi)有相應(yīng)抗體存在。

[檢驗(yàn)方法的局限性]某些文獻(xiàn)報(bào)告指出使用抗IgG測(cè)定抗體偶爾會(huì)失敗，可依靠含有抗C3成分的多價(jià)抗球蛋白試劑測(cè)定。沒(méi)有被IgG 測(cè)得的抗體在某些病例中可能有臨床意義?？笽gG可用在抗體篩選和相容性試驗(yàn)中，但必須認(rèn)識(shí)到它的局限性。