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直接抗人球蛋白試劑盒操作步驟

更新時(shí)間:2021-10-12      瀏覽次數(shù):583

直接抗人球蛋白試劑盒操作步驟


簡(jiǎn)要描述:直接抗人球蛋白試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)。用于抗球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn))是測(cè)定結(jié)合在紅細(xì)胞上的抗體和/或補(bǔ)體的主要方法。直接Coombs試驗(yàn)是檢測(cè)體內(nèi)已被抗體和/或補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞。間接Coombs試驗(yàn)通過(guò)血清與細(xì)胞的孵育,證實(shí)抗體和/或補(bǔ)體與紅細(xì)胞在體外的結(jié)合。根據(jù)醫(yī)療器械體外診斷試劑注冊(cè)分類(lèi),本試劑暫時(shí)只用于直接抗球蛋白試驗(yàn)。



[檢驗(yàn)方法]

1.     標(biāo)本的收集:見(jiàn)[樣本要求]

2.     直接抗球蛋白試驗(yàn):


2.1 將1滴受檢者3%紅細(xì)胞懸液加入干凈的小試管中(75×12mm),用鹽水洗滌3次[以3400轉(zhuǎn)/分(1000g),離心1分鐘]。每次洗滌后,將上清液全部倒出。


2.2 加入2滴抗IgG, C3d (多特異性)或抗IgG或抗C3d,以3400轉(zhuǎn)/分(1000g),離心15秒,用肉眼或借助光鏡觀(guān)察凝集,并按程度記錄結(jié)果。


2.3 判斷結(jié)果須持一定角度輕輕地?fù)u動(dòng)試管直到松動(dòng)所有的細(xì)胞,然后反復(fù)傾斜試管,直到均勻的細(xì)胞懸液(陰性)或者凝集物(陽(yáng)性)為止。


2.4 如陰性結(jié)果,在室溫中放置5-10分鐘,再離心一次,重讀結(jié)果。這樣做,陰性反應(yīng)有時(shí)會(huì)變成陽(yáng)性。


    注意:僅對(duì)C3d和IgA致敏紅細(xì)胞有增強(qiáng)作用,IgG致敏細(xì)胞反而會(huì)變?nèi)酰ㄒ?jiàn)注意事項(xiàng))。


3.     陽(yáng)性對(duì)照(IgG抗D致敏細(xì)胞):


3.1 每批新的試劑,或在4℃保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng),需做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn),至少每月一次。1滴陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞加2滴直接抗人球蛋白試劑,離心判定結(jié)果。


3.2 在試驗(yàn)中,于判為陰性的試管內(nèi)加入1滴陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞,再離心,然后重懸浮,判定結(jié)果。如果zui初洗滌能充分除去所有未結(jié)合的球蛋白,結(jié)果為陽(yáng)性。這是一個(gè)重要的對(duì)照,因?yàn)檫@是檢測(cè)細(xì)胞是否洗滌充分的*方法。


3.3 陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞(IgG抗D致敏細(xì)胞)制備: 1份市售抗D(IgG)試劑(效價(jià)≥1:8)+1份Rh(D)陽(yáng)性O(shè)型紅細(xì)胞混勻,370C水浴30分鐘,用生理鹽水三洗,配成3%紅細(xì)胞懸液,當(dāng)天使用。


[檢驗(yàn)結(jié)果的解釋] 


陽(yáng)性反應(yīng)——出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。表示紅細(xì)胞上有相應(yīng)抗體存在。


陰性反應(yīng)——紅細(xì)胞不凝集。表示紅細(xì)胞沒(méi)有相應(yīng)抗體存在。


[檢驗(yàn)方法的局限性]某些文獻(xiàn)報(bào)告指出使用抗IgG測(cè)定抗體偶爾會(huì)失敗,可依靠含有抗C3成分的多價(jià)抗球蛋白試劑測(cè)定。沒(méi)有被IgG 測(cè)得的抗體在某些病例中可能有臨床意義??笽gG可用在抗體篩選和相容性試驗(yàn)中,但必須認(rèn)識(shí)到它的局限性。

 


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