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丙烯葡聚糖凝膠 S 系列現(xiàn)貨銷售
丙烯葡聚糖凝膠系列填料是烯丙基葡聚糖和 N,N'-亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚物,平均粒徑為 50μm,同時增加了基體的剛性,確保快速流動特性和高分辨率。
操作步驟
3.1 裝柱
(1)讓所有的材料和試劑均平衡至層析實驗的溫度。配制緩沖液,對所有的緩沖液進行脫氣處理。 (2)檢查層析柱所有部件,特別是過濾網(wǎng),密封圈,螺旋塞是否緊密,玻璃管是否干凈和完整。
(3)根據(jù)需要量取相應(yīng)量的凝膠,用去離子水清洗掉 20%乙醇。
(4)將柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位,務(wù)必使底端無氣泡。
(5)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(6)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定(注意壓力不要超過填料最大耐壓)。
3.2 平衡
上樣前平衡層析柱至少 5-10 個柱體積,直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的 pH 值和電導值等于上柱 Buffer 的 pH 值和電導值)。
3.3 上樣
(1)樣品用平衡液配制,樣品一定要離心或過濾后上樣(0.45um 濾膜),如果樣品鹽濃度太大,則需要處理后再上樣。
(2)推薦的上樣量不超過柱體積的 5%。
3.4 洗脫
用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
3.5 再生
一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。在一些應(yīng)用中,諸如變性蛋白質(zhì)或脂質(zhì)體物質(zhì)在再生過程中洗脫不掉。出現(xiàn)下面這些情況,是必須需要清洗再生的:
(1)背壓增加;
(2)色譜柱頂部的顏色變化;
(3)分辨率降低;
(4)轉(zhuǎn)換接頭和凝膠表面之間出現(xiàn)空隙。
如果觀察到壓力增大,在開始柱清潔程序之前先檢查管路中的各個過濾閥、過濾膜是否被污染,然后通過用 0.1M NaOH 洗滌柱子,除去沉淀的蛋白質(zhì),非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和脂蛋白。
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