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明膠B型溶液的制備經(jīng)驗
明膠凍干粉室溫密封保存保持數(shù)年穩(wěn)定。但在空氣中加熱到100°C,會膨脹變軟,解聚產(chǎn)生一種碳質(zhì)并伴隨吡啶堿類和氨氣的產(chǎn)生。<35-40°C明膠膨脹且吸收5~10倍體積的水產(chǎn)生凝膠。明膠溶于甘油和醋酸,在熱水比冷水溶解性強。幾乎不溶于大多數(shù)有機溶劑比如醇類、氯仿、二硫化碳、四氯化碳、酯類、苯類、酮類和油。
一、明膠溶液的制備
1.1明膠的溶解
根據(jù)實驗所需的明膠濃度,稱取適量明膠粉末,加入含雙蒸水或PBS緩沖液的容器內(nèi),按照以下兩種方法之一:1)明膠經(jīng)10 min浸泡后,用熱水浴加熱(溫度不要超過70℃),攪拌直至*溶解;2)明膠經(jīng)10 min浸泡后用小火加熱(溫度不要超過70℃),并不斷攪拌直至*溶解;
1.2明膠的除菌
按照以下兩種方法之一
1)高壓滅菌:將配好的明膠溶液(常用濃度0.1%~2.0%之間)裝入瓶內(nèi),121℃,15 psi,高壓滅菌20min;
2)濾膜除菌:低濃度明膠溶液(如0.1%或0.2%)溶解后可用0.2μm濾膜除菌。但需多準備幾個濾器,因為明膠相對比較難過濾。
1.3明膠的保存
明膠溶液穩(wěn)定性比較高,置于4℃保存能長期保持穩(wěn)定?!咀⒁狻浚簻囟忍岣邥黠@降低明膠強度和粘度,導(dǎo)致性能降低。
二、明膠溶液的包被方法
具體的使用濃度和使用量依據(jù)細胞類型和實驗?zāi)康亩ā?/p>
2.1用組織培養(yǎng)級別的水配制2%(w/v)的明膠溶液;
2.2 121℃,15 psi,高壓滅菌20-30 min;
2.3 按照5-10μL明膠溶液/cm2(或0.1-0.2 mg/cm2)的比例包被培養(yǎng)皿/板/瓶表面。充分覆蓋包被表面。
2.4 放置37℃培養(yǎng)箱,至少干燥2h。吸掉多余明膠溶液,用培養(yǎng)基或PBS緩沖液清洗一遍,晾干后即可使用。
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