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多聚甲醛固定細胞的原理
多聚甲醛固定細胞時,能使細胞內的自由氨基基團發(fā)生化學交聯(lián),形成一網狀結構,把細胞的各個結構成分連接起來。但單獨用多聚甲醛固定細胞不能使抗體進入細胞內,因此,標本經固定后必須用非離子去污劑透化標本。商業(yè)甲醛溶液不能用于細胞染色固定,因為其不具有多聚甲醛固定細胞的優(yōu)點,且細胞會被甲醇固定。
固定液可使細胞或組織的蛋白質凝固,終止內源性或外源性酶反應,防止組織自溶或異溶,以保持原有結構和形態(tài)。對免疫組化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或彌散。固定液種類很多,常見的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。其固定原理不同,各有優(yōu)缺點。目前在科學研究中多聚甲醛應用最廣,通過形成分子間的交聯(lián)從而使細胞或組織的三維結構得以被固定。多聚甲醛是甲醛的聚合物,性質比甲醛穩(wěn)定,且對抗原的破壞能力弱于甲醛,因此,科學研究中常用多聚甲醛作為固定劑。
4%多聚甲醛固定液是一種廣泛用于免疫組化、免疫熒光(Immunofluorescence, IF)、免疫細胞化學、流式分析等檢測時組織、組織切片、細胞等生物樣品固定的溶液。本產品配制在PBS溶液中,可直接用于組織或細胞的固定,無需稀釋。若需使用低濃度多聚甲醛,可使用PBS按比例稀釋。
使用注意事項:
1、多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。
2、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。
3、多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。
4、多聚甲醛可長期存在于固定過的細胞或組織樣品中,固定完成后用適當?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留,因此后續(xù)實驗結果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。
5、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網格結構可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。
6、本產品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
7、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8、本產品僅供科研實驗用,不做其它用途。
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