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6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)檢測試劑盒

描述:測定意義:
G6PDH(EC 1.1.1.49)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯,同時將NADP+還原為NADPH,供生物合成及維持細(xì)胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。
6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:485
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標(biāo)題:6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)檢測試劑盒

 

測定原理:

G6PDH催化NADP+還原生成NADPH,在340 nm下測定NADPH增加速率。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體60mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體50 mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×1,-20保存;用時每支加275μL雙蒸水充分溶解備用; 

試劑三:粉劑×1-20保存;用時每只加275μL雙蒸水充分溶解備用。

樣本的前處理

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

G6PDH測定操作表:

試劑名稱μL

測定管

試劑一

750

試劑二

10

試劑三

10

樣本

30

測定前將試劑一置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中預(yù)熱10min左右,將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,加樣本的同時開始計時;混勻,在34 0 nm波長下記錄1min時的初始吸光度A1,迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中,準(zhǔn)確反應(yīng)5min;迅速取出比色皿并擦干,記錄6min時的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。

注意事項:

1、若A2-A1大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,使A2-A1小于0.5,可提高檢測靈敏度。

2、實驗時,試劑二、試劑三和樣本在冰上放置,以免變性和失活。試劑一3725水浴放置。

3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

G6PDH活力單位的計算:

1、血清(漿)G6PDH活力的計算:

單位的定義:每升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 μmolNADPH定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/L)=反應(yīng)總體積(800μL÷樣本體積(30μL÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3×ΔA =857×ΔA

2、組織中G6PDH活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/mg prot)=反應(yīng)總體積(800μL÷樣本體積(30μL÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3×ΔA ÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL=857×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/g 鮮重)=反應(yīng)總體積(800μL÷樣本體積(30μL÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3×ΔA÷樣品鮮重(g/mL=857×ΔA÷樣品鮮重(g/mL

3、細(xì)菌或細(xì)胞中G6PDH活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/mg prot)=反應(yīng)總體積(800μL÷樣本體積(30μL÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3×ΔA ÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL=857×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL

2)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/104 cell)=反應(yīng)總體積(800μL÷樣本體積(30μL÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)(6.22×10-3×ΔA ÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104/mL=857×ΔA÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104/mL

 

6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)檢測試劑盒

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