標題：NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）檢測試劑盒

產品概述

NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒

測定意義：

ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產生丙酮酸和CO₂，以及伴隨NAD(P)⁺的還原反應，是蘋果酸代謝的關鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物ME活性測定較多，已經成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存。；

試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×2支，4℃保存；用時每支加1mL雙蒸水充分溶解備用；

試劑四：粉劑×2支，-20℃保存；用時每支加500μL雙蒸水充分溶解備用。

樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備 ：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，棄上清，按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種），340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。

注意事項：

1、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。

2、實驗時，試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃或25℃水浴放置。

3、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

4、兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)檢測試劑盒