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紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)檢測試劑盒

描述:測定意義:
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的酶系,在外源物質代謝中,尤其是藥物和毒物的代謝,具有重要作用。ERND在P450酶系中相當于CYP2B亞型,與藥物代謝的去甲基化密切相關。CYP2B具有催化底物形成非活性易于排泄的代謝產物而具有解毒作用,也可使某些藥物經CYP2B代謝活化。
紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)檢測試劑盒

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:530
產品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)檢測試劑盒

產品概述

紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)檢測試劑盒

測定原理:

ERND催化紅霉素釋放甲醛,通過Nash比色測定甲醛含量,即可計算出ERND活性。

自備儀器和用品:

普通離心機,超速離心機、可調式移液槍、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和冰。

試劑組成和配置:

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加100mL蒸餾水溶解。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1管,4℃保存。臨用前加1mL蒸餾水,充分溶解。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加0.5mL蒸餾水,充分溶解。

試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前,加蒸餾水4.5mL充分溶解。

試劑六:液體×1瓶,4℃保存。

試劑七:液體×1瓶,4℃保存。

標準液:液體×1瓶,-20℃保存。臨用前取1.5mL EP 管,加入10μl標準液,加990μl蒸餾水,混勻即為0.05 mmol/L標準甲醛溶液,4℃保存。

粗酶液提取:

1、除去細胞核,線粒體等大分子物質:稱約0.5g組織,加入1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心30min,取上清液,轉入超速離心管中。

2、粗制微粒體:100 000g4℃,離心60min,棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質:向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。

4、終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二0.5mL,充分震蕩溶解,即粗酶液,待測。該待測液需當天使用。

測定:

1. 分光光度計預熱30 min以上,調節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30 min以上。

3. 空白管:0.5mL EP管,加入10μL粗酶液,170μL試劑二,10μL試劑三,10μL蒸餾水,混勻后置于37℃水浴保溫30min;立即加入35μL試劑五,混勻后置于冰浴中5min;取出后加入35μL試劑六,混勻后室溫靜置5min;室溫8000rpm離心5min;取新的EP管,加入100μL上清液,100μL試劑七,混勻后60℃水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,于412nm測定光吸收,記為A空白管。每個樣品都需要做空白管。

4. 測定管:0.5mL EP管,加入10μL粗酶液,170μL試劑二,10μL試劑三,10μL試劑四,混勻后置于37℃水浴保溫30min;立即加入35μL試劑五,混勻后置于冰浴中5min;取出后加入35μL試劑六,混勻后室溫靜置5min;室溫8000rpm離心5min;取新EP管,加入100μL上清液,100μL試劑七,混勻后60℃水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,于412nm測定光吸收,記為A測定管。

5. 標準管:0.5mL EP管,加入100μL標準品,100μL試劑七,混勻后60℃水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,于412nm測定光吸收,記為A標準管。

紅霉素-N-脫甲基酶(ERND)檢測試劑盒

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