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描述:測定意義:AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類,屬于絲氨酸蛋白酶。此外,該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵,具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一,廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢、食品、制革等行業(yè)。堿性蛋白酶檢測試劑盒
標(biāo)題:堿性蛋白酶檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
堿性蛋白酶檢測試劑盒
測定原理:
在堿性條件下,AKP水解酪蛋白生成酪氨酸;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸生成鎢藍;鎢藍在680nm有特征吸收峰,測定680nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加5mL蒸餾水溶解。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入5mL試劑一,沸水浴中磁力攪拌溶解。
試劑四:粉劑×1瓶, 4℃保存。臨用前加20mL蒸餾水溶解。
試劑五:液體×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支,0.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一,冰上充分研磨,10000rpm 4℃離心10min,取上清液,即粗酶液。
測定:
1.分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到680 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.試劑二、試劑三和試劑四置于40℃水浴保溫30min以上。
3. 空白管:取0.5 mL EP管,加入20 μL粗酶液,40 μL試劑二,混勻后置于40℃水浴保溫10min;加入40μL試劑三,混勻后10000rpm 4℃離心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL試劑四,40μL試劑五,混勻后置于40℃水浴保溫20min,吸取200μL于680nm測定光吸收,記為A空白管。
4. 測定管:取0.5 mL EP管,加入20μL粗酶液,40μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min;加入40μL試劑二,混勻后10000rpm 4℃離心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL試劑四,40μL試劑五,混勻后置于40℃水浴保溫20min,吸取200μL于680nm測定光吸收,記為A測定管。(注意與空白管不同,先加試劑三,后加試劑二)
5. 標(biāo)準(zhǔn)管:取0.5 mL EP管,加入40μL標(biāo)準(zhǔn)品,200μL試劑四,40μL試劑五,混勻后置于40℃水浴保溫20min,吸取200μL于680nm測定光吸收,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
堿性蛋白酶檢測試劑盒
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