描述:測定意義:LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。測定原理:LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒
標題:乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒
產品概述
乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;
試劑一:液體15 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用,配好后-20 ℃保存,可保存兩周,禁止反復凍融;
試劑三:液體15 mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體50 mL×1瓶L,4℃保存;
樣品測定的準備:
1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 :
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,棄上清,按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復30次)。8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液或者生理鹽水進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定操作表(在1mL EP管中反應):
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
待測樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 250 | 250 |
試劑二 | 50 |
|
蒸餾水 |
| 50 |
充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min
試劑三 | 250 | 250 |
充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min
試劑四 | 750 | 750 |
充分混勻,室溫靜置3分鐘,450 nm下測定吸光度
注意事項:
1、粗酶液的提取必須在0℃ - 4℃中操做完成,以防止酶變性失活。測定過程中樣本﹑試劑二和標準應用液必須在冰上放置。
3、由于每個樣本都要做測定管和對照管,因此本試劑盒50管可測24個樣本。
乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒
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