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HRP標記的小鼠抗牛IgG

描述:HRP標記的小鼠抗牛IgG
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否,因此被稱為關鍵的試劑

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2020-06-22
  • 訪問量:404
產品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:HRP標記的小鼠抗牛IgG

產品概述

HRP標記的小鼠抗牛IgG

本產品僅用于研究用途,不用于人類、治療或診斷應用。

抗體來源Mouse
克隆類型Polyclonal
交叉反應cow
產品應用WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000  
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
分 子 量150kDa
性    狀Lyophilized or Liquid
濃    度1mg/ml
免 疫 原Full length plasma protein: 
亞    型IgG
純化方法affinity purified by Protein A
儲 存 液0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件

Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

 

 

酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否,因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中常用的是酶標記抗體,它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體,其次要有良好的制備方法。目前,高質量的酶(如辣根過氧化物酶,簡稱HRP)國內已有商品供應。高質量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上,宜選用產率高、不影響結合物的活性和不混雜干擾性物質且操作簡便易行的方法。

  (一) 酶制劑及其底物

  凡無毒性又能呈現(xiàn)有色化學反應的酶,原則上均可作為標記用。但作為標記抗體用的酶應滿足下列要求:(1)來源方便,易于純化;

  (2)比活性高,性質穩(wěn)定;

  (3)酶活性和量能用簡單方法測定。

  目前在免疫酶技術中常用的酶為辣根過氧化物酶(HRP)和鹼性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶,β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。

  由于辣根過氧化物酶(HRP)比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以常用。HRP廣泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多個同功酶組成,分子量為40,000,等電點為PH3~9,酶催化的ZUI適PH因供氫體不同而稍有差異,但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白ZUI大吸收光譜分別為403nm和275nm,。高純度的酶RZ值應在3.0左右(ZUI高可達3.4)。RZ值越小,非酶蛋白就越多。值得注意的是,純度并不表示酶活性,如當酶變性后,RZ值仍可不變。

  HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染料,通過反應可生成有色的氧化型染料(D)。酶促反應的過程如下:

 

  供氫體的種類很多,形成的產物特點不一。如DAB(3.3-二氨基聯(lián)苯胺)的反應產物為不溶性沉淀物,并有電子密度,故適宜于做免疫酶染色或電鏡觀察。5AS(5-氨基水楊酸)早期曾用于ELISA,但其溶解度不夠大,且空白孔不易控制到無色,現(xiàn)已很少應用。OT(鄰聯(lián)甲苯胺)的特點是能產生鮮艷的藍綠色產物且靈敏度較高,但反應中受溫度影響較大,而且由于產物不穩(wěn)定,需要在短時間內進行測定。目前用得較廣泛和較滿意的供氫體是:OPD

  (鄰苯二胺)和TMB(四甲基聯(lián)苯胺)。前者形成的產物為深桔黃色或棕色,后者產物為藍綠色,二者的可溶性均好,在避光處顏色穩(wěn)定,空白可近于無色,靈敏度上據報道后者比前者可高4倍以上。另外,還有一種供氫體稱ABTS[2,

  2'-邊氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)],其反應產物呈藍綠色,且靈敏度和穩(wěn)定性均好。尤其是在致癌的潛在可能性方面,ABTS與TMB皆是值得被優(yōu)選的供氫體。

  由于HRP的底物H2O2本身又是酶的抑制劑,因此酶促反應中使用的H2O2不能過量。應控制在經較短時間反應后呈色即達高峰(說明H2O2已消耗殆盡)。這樣即使再延長時間也不會增加反應產物的顏色。

 

HRP標記的小鼠抗牛IgG

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