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標題:大鼠雌二醇(E2)ELISA定量檢測試劑盒
產品概述
【產品名稱】
通用名稱:大鼠雌二醇(E2)ELISA定量檢測試劑盒
英文名稱:Rat Progesterone ELISA KIT
【包裝規(guī)格】
96T/48T
【預期用途】
僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中孕酮(PROG)的濃度。
【檢驗原理】
本試劑盒采用競爭法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。在預包被抗孕酮(PROG)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中,加入大鼠 孕酮(PROG)校準品和待測樣本,再加入HRP標記的大鼠 孕酮(PROG)抗原(酶標抗原),經過溫育與充分洗滌,去除未結合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗體-酶標抗原的免疫復合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,產生藍色產物,在終止液(2M 硫酸)作用下,最終轉化為黃色,在酶標儀450nm波長上測定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測樣品中大鼠 孕酮(PROG)的濃度負相關。擬合校準品曲線,可以計算出樣本中大鼠 孕酮(PROG)的濃度。
【主要組成成分】
主要成分
組分 | 數量 | 主要成分 | 開封后儲存 |
校準品 | 0.3ml/管 | -- | 2-8℃14天 |
包被微孔板 | 96T/48T | 預包被固相抗體 | 2-8℃14天 |
HRP標記抗原 | 10mL | HRP標記的檢測抗原 | 2-8℃180天 |
底物液A | 6mL | 0.01%過氧化氫 | 2-8℃180天 |
底物液B | 6mL | 0.1%TMB | 2-8℃180天 |
終止液 | 6mL | 2mol/L稀硫酸 | 2-8℃180天 |
樣本-稀釋液 | 6mL | PBS | 2-8℃180天 |
20×濃縮洗滌液 | 25mL | 0.05%Tween20 | 2-8℃180天 |
說明書 | 1份 | -- | -- |
自封袋 | 1個 | -- | -- |
不干膠 | 2片 | -- | -- |
標準品濃度依次為:16、8、4、2、1、0 ng/mL
本品必須按照具有潛在的感染性進行處理,處理過程應當遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個月。
2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后,按照建議的條件保存,校準品、包被微孔板和HRP標記抗體,有效期為14天,其他成分在標簽標明的有效期內是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀,如Thermo MK3,或者國產酶標儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
2、血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
4、組織勻漿:用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液,稱重后將組織,剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎或反復凍融。最后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘,取上清檢測。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗方法】
試劑準備
1、使用前,所有的組分都要至少復溫30min,確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結晶產生,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。
操作程序
1. 按前面說明書描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
2. 從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。設置標準品孔、空白孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,空白孔不加,樣本孔加待測樣本50μL。
3. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100μL。
4. 用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20S,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復5次。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡30s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。
6. 將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
7. 所有孔加入終止液50μL,在450波長的酶標儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
【實驗結果計算】
檢測完成后,以標準品濃度做為縱坐標,對應的吸光度(OD值)作為橫坐標,利用計算機軟件,采用四參數Logistic曲線擬合(4-pl),創(chuàng)建標準曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋,通過上述方法測的的濃度值,要乘以稀釋倍數,才是樣品的最終濃度。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內使用,過期產品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標準品濃度值,請將樣本適當稀釋后,再重新測定。
6、通過其他方法得到的檢測結果,與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。
【產品性能指標】
1. 外觀和物理檢查:試劑盒應組分齊全,內外包裝均應完整,標簽清晰,液體試劑無滲漏。各組分裝量不少于表1中要求。
2. 線性: 用四參數Logistic曲線擬合(4-pl),在1 ng/mL – 16 ng/mL范圍內,劑量-反應曲線相關系數(r)的值應不低于0.9900。
3. 精密度
3.1分析內精密度:試劑盒質控品測定結果的變異系數(CV)應不大于15.0%。
3.2批間精密度:在三個不同批次產品之間,質控品測定結果的變異系數(CV)應不大于15.0%
4. 蕞低檢出限:蕞低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
5. 質控品測定值: 每次檢測結果均應在允許范圍內。
【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應,避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護手套,實驗完成后洗手。
技術提示
1、混合蛋白溶液時,避免起泡。
2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,避免交叉污染。
3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體,保存過程中變?yōu)樗{色,代表底物溶液已經失效,不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍色底物產物,會瞬間變?yōu)辄S色。
6、實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序,每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別,進行廢物和污物的處理,同時要嚴格依照有關規(guī)定對待所有的廢物和污物。
大鼠雌二醇(E2)ELISA定量檢測試劑盒
南京億迅生物科技有限公司出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩(wěn)定,價格實惠,在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。
該類產品還有小鼠孕酮(PROG)ELISA定量檢測試劑盒,小鼠組胺(HIS)ELISA定量檢測試劑盒,小鼠前列腺素(PG)ELISA定量檢測試劑盒,大鼠雌二醇(E2)ELISA定量檢測試劑盒等。
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