有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)曲線

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標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法依據(jù)？


GB/T22554-2010《基于標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性校準(zhǔn)》中：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)覆蓋正常操作條件下的被測(cè)量范圍；

2、標(biāo)準(zhǔn)樣品的組分盡量與被測(cè)樣品組分一致；

3、標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度值應(yīng)等距離的分布在被測(cè)量范圍；

4、標(biāo)準(zhǔn)樣品的個(gè)數(shù)至少應(yīng)有3個(gè)濃度；

5、每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)至少重復(fù)2次，這個(gè)重復(fù)是指從稀釋開(kāi)始；

如果國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)有相應(yīng)的濃度系列推薦，盡量按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。工作中我們經(jīng)常采用線性校準(zhǔn)，因?yàn)榫€性方程為簡(jiǎn)潔。





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什么是校準(zhǔn)曲線？


校準(zhǔn)曲線包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和工作曲線，前者用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列直接測(cè)量，沒(méi)有經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)程，這對(duì)于樣品往往造成較大誤差；而后者所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過(guò)了與樣品相同的消解、凈化、測(cè)量等全過(guò)程。





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首先標(biāo)曲要做幾個(gè)點(diǎn)？


標(biāo)準(zhǔn)曲線需要幾個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，是由所檢測(cè)組分的濃度范圍、分析儀響應(yīng)特性、干擾因素、濃度與檢測(cè)信號(hào)響應(yīng)類型有關(guān)的。

3個(gè)點(diǎn)：對(duì)于一些低濃度，特別是微量分析，并且濃度范圍不是很大的，檢測(cè)器響應(yīng)可靠，背景干擾非常小的，則可以選用較少的工作點(diǎn)就行，一般有3個(gè)濃度點(diǎn)就足夠了，有些甚至可以只用一個(gè)濃度點(diǎn)就行，另一個(gè)點(diǎn)直接用坐標(biāo)原點(diǎn)。



4~6 個(gè)點(diǎn)：對(duì)于平時(shí)測(cè)量的樣品濃度范圍較寬，并且檢測(cè)器響應(yīng)不*是一次曲線（直線）的，可以采用二次曲線或分段校正方式，以減少數(shù)據(jù)偏差，這種情況就需要多用幾個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，如果不分段，數(shù)據(jù)點(diǎn)有4~6 個(gè)就夠用。



至少兩個(gè)點(diǎn)：但如果是分段校正，則每段需要至少兩個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。而對(duì)于一些樣品無(wú)濃度范圍規(guī)律的，特別是一些檢測(cè)機(jī)構(gòu)，如果分析儀的檢測(cè)響應(yīng)可靠，環(huán)境因素影響少的，可以做校正曲線。若是環(huán)境因素影響大的，則不必做校正曲線，而采用標(biāo)準(zhǔn)加入法或標(biāo)準(zhǔn)加入-一次稀釋法反而簡(jiǎn)便一些。



實(shí)際上，我們一般是做五個(gè)點(diǎn)（不包括零濃度）；一般以檢出限的5~10倍為第一個(gè)點(diǎn)，以后根據(jù)1倍遞增，高濃度是低濃度的10~20倍為宜（理化分析實(shí)驗(yàn)為例）。當(dāng)然，要根據(jù)儀器的靈敏度來(lái)調(diào)整。





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標(biāo)曲R值是幾個(gè)9才合格？


實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（方法）的要求使用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。所用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)覆蓋被測(cè)樣品的濃度范圍。檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（方法）如無(wú)具體的要求，至少使用5個(gè)標(biāo)樣（除空白外）建立線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個(gè)點(diǎn)重復(fù)測(cè)定1-3次，對(duì)于篩選方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98，對(duì)于確證方法，相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。

其實(shí)，大于0.99是判斷是否為線性相關(guān)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)際應(yīng)用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測(cè)結(jié)果只用接近高濃度一半（中間濃度）的位置才比較準(zhǔn)確，如果線性大于0.999的話，在整個(gè)線性范圍內(nèi)都會(huì)有一個(gè)比較滿意的結(jié)果。



如果檢測(cè)的線性不好，可以減少標(biāo)準(zhǔn)的覆蓋范圍，將標(biāo)準(zhǔn)的濃度調(diào)整到待測(cè)樣品濃度附近，這樣結(jié)果也是非常準(zhǔn)確的。例如，樣品的濃度約20ppb，但在0~50ppb范圍建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，但線性非常不理想，這時(shí)可以將標(biāo)準(zhǔn)范圍調(diào)整到15~25ppb之間，作五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。





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標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)？


（1）線性檢驗(yàn):

即檢驗(yàn)校準(zhǔn)曲線的精密度。對(duì)于以4～6個(gè)濃度單位所獲得的測(cè)量信號(hào)值繪制的校準(zhǔn)曲線，分光光度法一般要求其相關(guān)系數(shù) | r | ≥0.9990，否則應(yīng)找出原因并加以糾正，重新繪制合格的校準(zhǔn)曲線。



（2）截距檢驗(yàn)：

即檢驗(yàn)校準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度，在線性檢驗(yàn)合格的基礎(chǔ)上，對(duì)其進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程 y= a+bx ，然后將所得截距a與0作t檢驗(yàn)，當(dāng)取95%置信水平，經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異時(shí)，a可做0處理，方程簡(jiǎn)化為y= bx，移項(xiàng)得x=y/b。在線性范圍內(nèi)，可代替查閱校準(zhǔn)曲線，直接將樣品測(cè)量信號(hào)值經(jīng)空白校正后，計(jì)算出試樣濃度。



當(dāng)a與0有顯著性差異時(shí)，表示校準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確度不高，應(yīng)找出原因予以校正后，重新繪制校準(zhǔn)曲線并經(jīng)線性檢驗(yàn)合格。在計(jì)算回歸方程，經(jīng)截距檢驗(yàn)合格后投入使用。



回歸方程如不經(jīng)上述檢驗(yàn)和處理，就直接投入使用，必將給測(cè)定結(jié)果引入差值相當(dāng)于解決a的系統(tǒng)誤差。



（3）斜率檢驗(yàn):

即檢驗(yàn)分析方法的靈敏度，方法靈敏度是隨實(shí)驗(yàn)條件的變化而改變的。在*相同的分析條件下，僅由于操作中的隨機(jī)誤差導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范圍，此范圍因分析方法的精度不同而異。例如，一般而言，分子吸收分光光度法要求其相對(duì)差值小于5%，而原子吸收分光光度法則要求其相對(duì)差值小于10%等等。





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標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期的規(guī)定？


（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線屬于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的范圍，按照《實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》中結(jié)果控制的要求：定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）進(jìn)行監(jiān)控和/或使用次級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）開(kāi)展內(nèi)部質(zhì)量控制。



（2）準(zhǔn)則中并未對(duì)“定期”進(jìn)行規(guī)定，所以如果“定期”，就根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況來(lái)定了。



（3）既然準(zhǔn)則上沒(méi)說(shuō)明，那根據(jù)一般的分析教材，當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件（包括藥劑、人員、儀器等）發(fā)生變化時(shí)，好重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。一般來(lái)說(shuō)儀器如果使用，并經(jīng)過(guò)檢定，是處于穩(wěn)定狀態(tài)，而人員藥劑的變化往往會(huì)較大。如果說(shuō)每次換個(gè)人操作都要換曲線，那工作量就太大了。