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培養(yǎng)基配制過(guò)程各環(huán)節(jié)的要求
基本原理
正確掌握培養(yǎng)基的配制方法是從事微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)工作的重要基礎(chǔ),由于微生物種類(lèi)及代謝類(lèi)型的多樣性,因而用于培養(yǎng)微生物培養(yǎng)基的種類(lèi)也很多,它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養(yǎng)基的配制程序卻大致相同,例如器皿的準(zhǔn)備,培養(yǎng)基的配制與分裝,棉塞的制作,培養(yǎng)基的滅菌,斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查等基本環(huán)節(jié)大致相向。
三、實(shí)驗(yàn)材科
(一)藥品
待配各種培養(yǎng)的組成成分,瓊脂,1mol/L NaOH溶液,1mol/l (升,統(tǒng)一用大寫(xiě))HCl溶液。
(二)儀器
天平或臺(tái)秤,高壓蒸汽滅菌鍋。
(三)玻璃器皿
移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。
(四)其他物品
藥匙、稱(chēng)量紙、pH試紙、記號(hào)筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報(bào)紙等。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
(一)玻璃器皿的洗滌和包裝
1.玻璃器皿的洗滌
玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將錐形瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中,用毛刷刷洗,然后用自來(lái)水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡。再用自來(lái)水及蒸餾水沖洗,洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。
2.滅菌前玻璃器皿的包裝
(1)培養(yǎng)皿的包裝 培養(yǎng)皿由一蓋—底組成一套??捎脠?bào)紙將幾套培養(yǎng)皿包成一包,或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內(nèi),加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅菌之后才能使用。
(2)移液管的包裝 在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脫脂棉)。它的作用是避免外界及口中雜菌吹入管內(nèi),并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應(yīng)距管口約0.5cm左有。棉花自身長(zhǎng)度約1~1.5cm。塞棉花時(shí),可用一外圈拉直的曲別針,將少許棉花塞入管口內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜,吹時(shí)以能通氣而又不使棉花滑下為準(zhǔn)。
先將報(bào)紙裁成寬約5cm左右的長(zhǎng)紙條,然后將已塞好棉花的移液管放在長(zhǎng)條報(bào)紙的一端,約成45度角,折疊紙條包住,用左手握住移液管身,右手將移液管壓緊,在桌面上向前搓轉(zhuǎn),以螺旋式包扎起來(lái)。上端剩余紙條,折疊打結(jié),準(zhǔn)備滅菌。
(二)液體及固體培養(yǎng)基的配制過(guò)程
1.液體培養(yǎng)基配制
(1)稱(chēng)量一般可用1/100粗天平稱(chēng)量配制培養(yǎng)基所需的各種藥品。先按培養(yǎng)基配方計(jì)算各成分的用量,然后進(jìn)行準(zhǔn)確稱(chēng)量。
(2)溶化 將稱(chēng)好的藥品置于一燒杯中,先加入少量水(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要可用自來(lái)水或蒸餾水),用玻棒攪動(dòng),加熱溶解。
(3)定容 待全部藥品溶解后,倒入一量筒中,加水至所需體積。如某種藥品用量太少時(shí),可預(yù)先配成較濃溶液,然后按比例吸取一定體積溶液,加入至培養(yǎng)基中。
(4)調(diào)pH 一般用pH試紙測(cè)定培養(yǎng)基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙,然后用鑷子夾取此段pH試紙,在培養(yǎng)基中蘸一下,觀看其pH范圍,如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時(shí),可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)pH時(shí),應(yīng)逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部過(guò)酸或過(guò)堿,破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌,并不時(shí)用pH試紙測(cè)試,直至達(dá)到所需pH為止。
(5)過(guò)濾 用濾紙或多層紗布過(guò)濾培養(yǎng)基。一般無(wú)特殊要求時(shí),此步可省去。
2.固體培養(yǎng)基的配制
配制固體培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸,再將稱(chēng)好的瓊脂(1.5%-2%)加入,并用玻棒不斷攪拌,以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化,后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去水分。
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