標(biāo)題：氨基比林-N-去甲基化酶（AND）檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測試劑盒

自備儀器和樣品：

可見分光光度計、普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、蒸餾水、無水乙醇和冰。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加100mL蒸餾水充分溶解。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色瓶），4℃避光保存。臨用前加入1050 μ L無水乙醇，充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入510 μ L蒸餾水，充分溶解。

試劑五：粉劑×1瓶，室溫保存。臨用前加3600μ L蒸餾水，充分溶解。

試劑六：液體×1瓶，室溫保存。

試劑七：液體×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1瓶，-20℃保存。臨用前取1.5 mL EP 管，加入10 μ L標(biāo)準(zhǔn)液，加990 μ L蒸餾水，混勻即為50μmol/L標(biāo)準(zhǔn)甲醛溶液，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1、除去細(xì)胞核，線粒體等大分子物質(zhì)：稱約0.2 g組織，加入500μL試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液轉(zhuǎn)入超速離心管。

2、粗制微粒體：4℃，100 000g，離心60min，棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加500μL試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。

4、終微粒體：向步驟3的沉淀中加試劑二200μL，蓋緊后充分震蕩溶解，即粗酶液，待測。該待測液需當(dāng)天使用。

測定：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30min以上。

3. 空白孔：取1支EP管，加入10μL粗酶液，170μL試劑二，10μL試劑三，10μL蒸餾水，混勻后置于37℃水浴保溫30min；立即加入35μL試劑五，混勻后置于冰浴中5min；取出后加入35μL試劑六，混勻后室溫靜置5min；室溫8000rpm離心5min；取新的EP管，加入100μL上清液，100μL試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，于412nm測定光吸收，記為A空白管。每個樣品都需要做空白管。

4. 測定孔：取1支EP管，加入10μL粗酶液，170μL試劑二，10μL試劑三，10μL試劑四，混勻后置于37℃水浴保溫30min；立即加入35μL試劑五，混勻后置于冰浴中5min；取出后加入35μL試劑六，混勻后室溫靜置5min；室溫8000rpm離心5min；取1支新EP管，加入100μL上清液，100μL試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，加入測定孔，于412nm測定光吸收，記為A測定管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)孔：取1支EP管，加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品，100μL試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，加入標(biāo)準(zhǔn)孔，于412nm測定光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測試劑盒