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胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒

描述:測定意義:
ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:394
產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒

測定原理:

利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340 nm下測定NADPH濃度的增加。

所需的儀器和用品:

紫外分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體50 mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×2支,4保存;用時每支加275μL雙蒸水充分溶解備用;

試劑三:粉劑2支,-20保存;用時每支加275μL雙蒸水充分溶解備用;

樣本的前處理:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定操作表:

試劑名稱μL

測定管

試劑一

750

試劑二

10

試劑三

10

樣本

30

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,加樣本的同時開始計時,在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1;迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中,準確反應(yīng)2分鐘;迅速取出比色皿并擦干,記錄220秒時的吸光度A2。計算ΔA=A2-A1。

注意事項:

1、若A2-A1大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,使A2-A1小于0.5,可提高檢測靈敏度。

2、實驗時,試劑二、試劑三和樣本在冰上放置,以免變性和失活;試劑一3725水浴放置。

3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準確性。

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒

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