標(biāo)題：苯胺-4羥化酶（AH）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

苯胺-4羥化酶(AH)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定意義：

細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。AH在P450酶系中相當(dāng)于CYP2E1亞型，CYP2E1不僅參與了藥物的代謝，而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過(guò)程。

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、普通離心機(jī)，低溫超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)板和冰。

試劑組成和配置：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入100 mL蒸餾水，充分溶解。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2600 μL蒸餾水，充分溶解。

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解。

試劑六：粉劑×1瓶（腐蝕性試劑），4℃避光保存。臨用前加入5mL蒸餾水，充分溶解。

試劑七：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5 mL蒸餾水，充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1瓶，10μmol/L，4℃避光保存。

粗酶液提?。?/span>

1. 除去細(xì)胞核和線粒體等：稱約0.2 g組織，加入4℃預(yù)冷的500 μ L試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

2. 粗制微粒體：4℃，100 000g，離心60min，棄上清液。

3. 除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加500 μ L試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。

4. 終微粒體：向步驟3的沉淀中加試劑二200 μ L，蓋緊后充分震蕩溶解，4℃保存待測(cè)。

測(cè)定：

1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到630 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30min以上。

3. 試劑五置于冰浴預(yù)冷30min以上。

4. 標(biāo)準(zhǔn)孔：在酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)孔中，依次加入100μL 標(biāo)準(zhǔn)液，50μL試劑六，50μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，于630 nm測(cè)定光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)孔。

5. 空白孔：取1支0.5 mL EP管，加入50μL粗酶液，100μL試劑三，50μL蒸餾水，混勻后37℃水浴中保溫30min；再加入100μL試劑五，混勻后冰浴5min，11000rpm，4℃，離心10min；在酶標(biāo)板空白孔中依次加入100μL上清液，50μL試劑六，50μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，于630 nm測(cè)定光吸收，記為A空白管。

6. 測(cè)定孔：取1支0.5 mL EP管，加入50μL粗酶液，100μL試劑三，50μL試劑四，混勻后37℃水浴中保溫30min；再加入100μL試劑五，混勻后冰浴5min，11000rpm，4℃，離心10min；在酶標(biāo)板空白孔中依次加入100μL上清液，50μL試劑六，50μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，于630 nm測(cè)定光吸收，記為A空白管。

苯胺-4羥化酶(AH)檢測(cè)試劑盒