標題：二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）

產(chǎn)品概述

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)檢測試劑盒

測定原理：

在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子的CO₂結(jié)合，產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸，并使還原型輔酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的變化可計算還原型輔酶I氧化速率，還原型輔酶I氧化速率可反應(yīng)Rubisco的活性。

需自備的儀器和用品：

分光光度計/、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：25mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入100uL雙蒸水充分溶解待用；

試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入100uL雙蒸水充分溶解待用；

粗酶液制備：

稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測定

（1）工作液的配制：臨用前在試劑二中加入22.5mL試劑一，充分混勻，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。

（2）在1mL石英比色皿中加入6uL樣本、7uL試劑三、7uL試劑四和180uL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時吸光值A1和2min20s時的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)檢測試劑盒