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描述:測定意義:Glu廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,不僅是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸之一,而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外,Glu還是味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。測定原理:利用提取液提取,然后用顯色劑進(jìn)行顯色,顯色后在570nm下進(jìn)行測定。谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒
標(biāo)題:谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒
產(chǎn)品概述
谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體50mL×2瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶, 4℃保存;臨用前每瓶加入5mL雙蒸水,用不完的試劑仍 4℃保存。
谷氨酸提?。?
細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品
收集細(xì)胞或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每1000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入2mL試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次), 8000g,常溫離心10min,取上清待測。
稱取約0.2g組織,加入2mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿, 8000g,常溫離心10min,取上清待測。
測定步驟
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
上清液 | 1000 |
|
試劑一 |
| 1000 |
試劑二 | 200 | 200 |
混勻,90℃水浴20min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,于570nm波長處比色,△A=A測定管-A對照管。對照管只要做一管。
注意事項(xiàng):
為提高檢測靈敏度,測定管的吸光值應(yīng)小于1,若大于1則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測定。
谷氨酸含量計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0328x- 2.423; x為谷氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計(jì)算
谷氨酸含量(µg/mg)=(△A +2.423)÷0.0328÷Cpr=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr
3、按照樣品質(zhì)量計(jì)算
谷氨酸含量(µg/g鮮重)=(△A +2.423)÷0.0328÷(W÷V樣總)=60.98×(△A+2.423) ÷W
4、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
谷氨酸含量(μg/104 cell)=(△A +2.423)÷0.0328÷(1000÷V樣總)=0.061×(△A+2.423)
V樣總:加入提取液體積,2mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;1000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),1000萬。
注意:該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測定,檢測下限為70µg/mL。
谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒
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