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乙酰輔酶A檢測試劑盒

描述:測定原理
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔酶A和草酰乙酸生成檸檬酸和輔酶A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應,乙酰輔酶A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反應了乙酰輔酶A含量的高低。
乙酰輔酶A檢測試劑盒

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2019-11-07
  • 訪問量:1053
產品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題:乙酰輔酶A檢測試劑盒

產品概述

乙酰輔酶A檢測試劑盒

測定意義

乙酰輔酶A廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。是生物體能源物質代謝過程中產生的一種重要的中間代謝產物。在體內能源物質代謝中是一個樞紐性的物質。糖、脂肪、蛋白質三大營養(yǎng)物質通過乙酰輔酶A匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化,經過這條通路*氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于ATP合成。此外,乙酰輔酶A是合成脂肪酸,酮體,膽固醇及其衍生物等生理活性物質的前體物質。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:液體×1瓶,4保存。

試劑二:粉劑×1支,-20保存。臨用前加入500uL試劑五充分溶解備用。

試劑三:液體×1支,4保存。臨用前加入500uL試劑五充分溶解備用。

試劑四:粉劑×1瓶,-20保存。臨用前加入45mL試劑五充分溶解備用。

試劑五:液體×1瓶,4保存。

工作液的配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.92 m L),將試劑二、三和四按照1:1:90的比例混合,或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻(可以測定48樣);加樣前37(哺乳動物)或25(其它物種)水浴鍋中預熱30 min。

乙酰輔酶A的提取

1、細菌或培養(yǎng)細胞:收集細菌或細胞到離心管內,棄上清,按照每400萬細菌或細胞加入1mL試劑一(如果吸光度太高,可以減少細菌或者細胞數(shù)量;如果吸光度太低,可以減少試劑一體積),超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次),13000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:稱取約0.1g組織(如果吸光度太高,可以減少組織質量),加入1mL試劑一(如果吸光度太低,可以減少試劑一體積)進行冰浴勻漿;13000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟

  1. 分光光度計預熱30min,用蒸餾水于340nm處調零。

2、取920uL工作液和100uL樣本至 1mL石英比色皿,混勻,立即記錄340nm20s的吸光值A180s時的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。

乙酰輔酶A檢測試劑盒

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