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描述:測(cè)定意義: ICL(EC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物種子在萌發(fā)過程中,通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一。異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理:
ICL催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD,NADH在340nm下有特征吸收峰,監(jiān)測(cè)340nm吸光度的減小速率可間接反應(yīng)ICL活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體×1支,4℃保存;
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入4mL雙蒸水,充分混勻待用。用不完的試劑-20℃保存;
樣本的前處理:
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),15000g,4℃,離心20分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織處理:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿;15000g ,4℃,離心20分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟:
(1)工作液的配置,將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中,充分混合溶解,置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴5min;
(2)在試劑四中加入4mL雙蒸水,充分溶解待用;
(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、150μL工作液和40μL試劑四,混勻,立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
異檸檬酸裂解酶(ICL)檢測(cè)試劑盒
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